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求大神土壤硝酸還原酶測定方法
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最近在測定土壤硝酸還原酶，主要采用的方法是關(guān)松蔭《土壤酶及其研究方法》中介紹的酚二磺酸比色法，測定過程中出現(xiàn)了一些問題一直導(dǎo)致實驗失敗，求大神們指導(dǎo)！！ 問題一，到底是用鮮樣還是用風(fēng)干樣？書中介紹的是風(fēng)干樣，但是很多大牛審稿人一聽到你測酶活用的是風(fēng)干的土樣直接就搖頭，對此一直非常困惑，可能水分含量對土壤酶活的影響很大所以很多中國的文獻(xiàn)都介紹用風(fēng)干樣，但土壤在風(fēng)干過程中對酶活應(yīng)該會造成很大的影響和損失吧？ 問題二，抽氣后如何密封？書中介紹的方法是用“減壓三角瓶抽氣3分鐘”，但實際操作中這一步實在是太難把握了，后來我訂做了小號的抽濾三角瓶，用抽濾三角瓶抽氣，然后抽氣結(jié)束后迅速用保鮮膜封住抽濾口，但是還是感覺這一過程會漏入很多空氣。 問題三，酚二磺酸處理后，用10%NaOH調(diào)色，幾次實驗最后都在這里失敗了，調(diào)至微黃色，上分光光度計測定后吸光值比標(biāo)線0點都低，調(diào)至明黃色，所有的處理又都是差不多的數(shù)值，感覺吸光值最后的高低完全是由比色液的顏色深淺決定的，那“用10%NaOH調(diào)色”調(diào)色這一步驟就非常難操作了，加入的NaOH多，比色液顏色深，吸光值高，NaOH少，數(shù)值就低。 問題四，書中介紹的方法在計算的時候的敘述是“硝酸還原酶活性，以24h后，10g土壤中被還原的硝態(tài)氮表示”，那我我想請問具體的計算公式是什么？是用處理-對照（滅菌土壤）么？ 求有經(jīng)驗的大神們指導(dǎo)啊！不甚感激�。� |
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