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求大神土壤硝酸還原酶測定方法
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最近在測定土壤硝酸還原酶，主要采用的方法是關(guān)松蔭《土壤酶及其研究方法》中介紹的酚二磺酸比色法，測定過程中出現(xiàn)了一些問題一直導致實驗失敗，求大神們指導！！ 問題一，到底是用鮮樣還是用風干樣？書中介紹的是風干樣，但是很多大牛審稿人一聽到你測酶活用的是風干的土樣直接就搖頭，對此一直非常困惑，可能水分含量對土壤酶活的影響很大所以很多中國的文獻都介紹用風干樣，但土壤在風干過程中對酶活應(yīng)該會造成很大的影響和損失吧？ 問題二，抽氣后如何密封？書中介紹的方法是用“減壓三角瓶抽氣3分鐘”，但實際操作中這一步實在是太難把握了，后來我訂做了小號的抽濾三角瓶，用抽濾三角瓶抽氣，然后抽氣結(jié)束后迅速用保鮮膜封住抽濾口，但是還是感覺這一過程會漏入很多空氣。 問題三，酚二磺酸處理后，用10%NaOH調(diào)色，幾次實驗最后都在這里失敗了，調(diào)至微黃色，上分光光度計測定后吸光值比標線0點都低，調(diào)至明黃色，所有的處理又都是差不多的數(shù)值，感覺吸光值最后的高低完全是由比色液的顏色深淺決定的，那“用10%NaOH調(diào)色”調(diào)色這一步驟就非常難操作了，加入的NaOH多，比色液顏色深，吸光值高，NaOH少，數(shù)值就低。 問題四，書中介紹的方法在計算的時候的敘述是“硝酸還原酶活性，以24h后，10g土壤中被還原的硝態(tài)氮表示”，那我我想請問具體的計算公式是什么？是用處理-對照（滅菌土壤）么？ 求有經(jīng)驗的大神們指導��！不甚感激��！ |
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