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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 層析/純化 » 核酸酶處理后目的蛋白消失
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[求助]
核酸酶處理后目的蛋白消失 已有1人參與
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我有一個問題，感覺對于過來人來說很簡單，但是我陷了進去，想不明白。故在此向各位求助，一起交流。 我的蛋白(VLP)分子篩純化，電泳檢測比較純，液相凝膠柱檢測有兩個峰，靠的比較近，差了一分鐘，馬爾文粒徑檢測均一。推測有一個是樣品峰，另一個是核酸峰，加入核酸酶后發(fā)現(xiàn)兩個峰都沒了，10.5min出現(xiàn)一個很高的峰，對照組核酸酶也在該位置出峰，只不過處理后樣品峰遠遠高于核酸酶峰。故推測VLP降解，通過電泳檢測，發(fā)現(xiàn)核酸酶條帶在18KD左右，目的蛋白沒了，反而多了一個比目的蛋白大了兩倍的蛋白。 我想問的是: 核酸在蛋白電泳上有條帶么； 核酸酶處理后樣品電泳檢測未發(fā)現(xiàn)目的條帶，目的蛋白有一個半胱氨酸，可能會形成二硫鍵，但是電泳前會將樣品變性，打開二硫鍵，為什么出現(xiàn)一個比目的蛋白大了兩倍的條帶？ @hc-material @gyesang 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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- 專業(yè): 核技術及其應用
- 管轄: 生物科學
3樓2018-05-21 10:29:54
2樓2018-05-21 07:19:38
送紅花一朵 |
謝謝回復。 但是蛋白上樣緩沖液中含有DTT，會打開二硫鍵。 原樣電泳有目的條帶； 經過核酸酶處理后的樣品，目的條帶消失，出現(xiàn)比目的條帶大兩倍的帶。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2018-05-21 17:41:27
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