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[求助]
核酸酶處理后目的蛋白消失 已有1人參與
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我有一個(gè)問(wèn)題,感覺(jué)對(duì)于過(guò)來(lái)人來(lái)說(shuō)很簡(jiǎn)單,但是我陷了進(jìn)去,想不明白。故在此向各位求助,一起交流。 我的蛋白(VLP)分子篩純化,電泳檢測(cè)比較純,液相凝膠柱檢測(cè)有兩個(gè)峰,靠的比較近,差了一分鐘,馬爾文粒徑檢測(cè)均一。推測(cè)有一個(gè)是樣品峰,另一個(gè)是核酸峰,加入核酸酶后發(fā)現(xiàn)兩個(gè)峰都沒(méi)了,10.5min出現(xiàn)一個(gè)很高的峰,對(duì)照組核酸酶也在該位置出峰,只不過(guò)處理后樣品峰遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于核酸酶峰。故推測(cè)VLP降解,通過(guò)電泳檢測(cè),發(fā)現(xiàn)核酸酶條帶在18KD左右,目的蛋白沒(méi)了,反而多了一個(gè)比目的蛋白大了兩倍的蛋白。 我想問(wèn)的是: 核酸在蛋白電泳上有條帶么; 核酸酶處理后樣品電泳檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)目的條帶,目的蛋白有一個(gè)半胱氨酸,可能會(huì)形成二硫鍵,但是電泳前會(huì)將樣品變性,打開(kāi)二硫鍵,為什么出現(xiàn)一個(gè)比目的蛋白大了兩倍的條帶? @hc-material @gyesang 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |


專家顧問(wèn) (職業(yè)作家)
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專家經(jīng)驗(yàn): +702 |
送紅花一朵 |
謝謝回復(fù)。 但是蛋白上樣緩沖液中含有DTT,會(huì)打開(kāi)二硫鍵。 原樣電泳有目的條帶; 經(jīng)過(guò)核酸酶處理后的樣品,目的條帶消失,出現(xiàn)比目的條帶大兩倍的帶。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |

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