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[求助]
核酸酶處理后目的蛋白消失 已有1人參與
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我有一個(gè)問(wèn)題，感覺對(duì)于過(guò)來(lái)人來(lái)說(shuō)很簡(jiǎn)單，但是我陷了進(jìn)去，想不明白。故在此向各位求助，一起交流。 我的蛋白(VLP)分子篩純化，電泳檢測(cè)比較純，液相凝膠柱檢測(cè)有兩個(gè)峰，靠的比較近，差了一分鐘，馬爾文粒徑檢測(cè)均一。推測(cè)有一個(gè)是樣品峰，另一個(gè)是核酸峰，加入核酸酶后發(fā)現(xiàn)兩個(gè)峰都沒(méi)了，10.5min出現(xiàn)一個(gè)很高的峰，對(duì)照組核酸酶也在該位置出峰，只不過(guò)處理后樣品峰遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于核酸酶峰。故推測(cè)VLP降解，通過(guò)電泳檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)核酸酶條帶在18KD左右，目的蛋白沒(méi)了，反而多了一個(gè)比目的蛋白大了兩倍的蛋白。 我想問(wèn)的是: 核酸在蛋白電泳上有條帶么； 核酸酶處理后樣品電泳檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)目的條帶，目的蛋白有一個(gè)半胱氨酸，可能會(huì)形成二硫鍵，但是電泳前會(huì)將樣品變性，打開二硫鍵，為什么出現(xiàn)一個(gè)比目的蛋白大了兩倍的條帶？ @hc-material @gyesang 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2018-05-21 07:19:38
hc-material
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3樓2018-05-21 10:29:54
送紅花一朵 |
謝謝回復(fù)。 但是蛋白上樣緩沖液中含有DTT，會(huì)打開二硫鍵。 原樣電泳有目的條帶； 經(jīng)過(guò)核酸酶處理后的樣品，目的條帶消失，出現(xiàn)比目的條帶大兩倍的帶。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2018-05-21 17:41:27
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