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酶連 已有3人參與
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請教各位 我最近在用TAKARA的T4 DNA連接酶做載體(6.5kb)和目的片段(0.5kb)的連接,但是翻看了一下說明書,沒有推薦反應(yīng)體系,不知道怎樣的配比才能提高連接效率,請各位指點迷津,另外大家都在用什么反應(yīng)條件,我看有37℃,16℃和4℃,哪個方法高效快捷呢?謝謝 |
銅蟲 (初入文壇)
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我個人常用的連接體系如下: 目的片段酶切產(chǎn)物 6微升 質(zhì)粒載體酶切產(chǎn)物 2微升 ddH2O 4微升 T4 連接酶10X Buffer 1.5微升 T4 連接酶 1.5微升 其中可根據(jù)測的目的片段和質(zhì)粒載體酶切產(chǎn)物的濃度調(diào)整摩爾體積,總比例為載體:目的片段=1:3~1:9,和樓上推薦的基本沒差,其余用水補(bǔ)全,共計15微升體系,16℃水浴連接過夜,望采納。 |
金蟲 (正式寫手)

新蟲 (初入文壇)
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