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請(qǐng)教各位 我最近在用TAKARA的T4 DNA連接酶做載體（6.5kb）和目的片段（0.5kb）的連接，但是翻看了一下說(shuō)明書(shū)，沒(méi)有推薦反應(yīng)體系，不知道怎樣的配比才能提高連接效率，請(qǐng)各位指點(diǎn)迷津，另外大家都在用什么反應(yīng)條件，我看有37℃，16℃和4℃，哪個(gè)方法高效快捷呢？謝謝 |
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ultimica
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
xh446063: 金幣+5, ★★★很有幫助 2015-06-19 19:16:48
xh446063: 金幣+5, ★★★很有幫助 2015-06-19 19:16:48
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我個(gè)人常用的連接體系如下： 目的片段酶切產(chǎn)物 6微升 質(zhì)粒載體酶切產(chǎn)物 2微升 ddH2O 4微升 T4 連接酶10X Buffer 1.5微升 T4 連接酶 1.5微升 其中可根據(jù)測(cè)的目的片段和質(zhì)粒載體酶切產(chǎn)物的濃度調(diào)整摩爾體積，總比例為載體：目的片段=1:3~1:9，和樓上推薦的基本沒(méi)差，其余用水補(bǔ)全，共計(jì)15微升體系，16℃水浴連接過(guò)夜，望采納。 |
3樓2015-06-16 10:26:20
董博士
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2樓2015-06-14 13:23:01
露露琦琦
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4樓2015-06-16 10:28:57
5樓2015-06-19 19:17:41
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