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PCR延長(zhǎng)核苷酸序列
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【答案】應(yīng)助回帖
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8*3=24,24+10=34，這個(gè)長(zhǎng)度不算太長(zhǎng)，而且跟你模板結(jié)合的實(shí)際上只有10，所以TM值只算那10個(gè)而已，你在設(shè)計(jì)引物下訂單的時(shí)候說(shuō)明這個(gè)情況，叫公司也計(jì)算那10個(gè)的TM值就行。 但是一般來(lái)說(shuō)，10個(gè)堿基的引物TM值是不高的，跟你另一端引物配合起來(lái)的時(shí)候退火溫度不好確定，所以你可以設(shè)計(jì)長(zhǎng)一點(diǎn)，15或者20個(gè)25個(gè)都行，那么就是8*3=24,24+25=49，實(shí)際結(jié)合的引物長(zhǎng)度為25。具體設(shè)計(jì)多長(zhǎng)就看你的實(shí)際需要，要看看另一端取多少個(gè)堿基，特異性怎樣，TM值先用vector nti來(lái)算，最好別太高，五十幾六十度就行，最終可以設(shè)計(jì)得到實(shí)際跟模板結(jié)合約20個(gè)堿基的一對(duì)引物，注意，是實(shí)際結(jié)合而不是引物總長(zhǎng)度。 圖片1.jpg |
4樓2013-08-18 17:02:03
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