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vegence新蟲 (初入文壇)
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[求助]
基因克隆求助!
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現(xiàn)在情況是我要克隆某基因cDNA序列,已知的是有該基因的cDS序列(3400bp)信息(師姐之前分段測(cè)序得出),我想克隆包括cds序列以及5’和3'非編碼區(qū)的cDNA全長,以CDS序列為模板分段設(shè)計(jì)了兩對(duì)引物,第一對(duì)引物的下游和第二對(duì)引物的上游互補(bǔ),想用重組PCR方法擴(kuò)出大部分cds序列(5'端和3'端各有50bp左右因不好設(shè)計(jì)引物,沒在擴(kuò)增范圍內(nèi)),我想問的是我這個(gè)思路對(duì)不對(duì),接下來該怎么辦?另外在NCBI上有預(yù)測(cè)的該基因的mRNA序列,之前也想用這個(gè)直接設(shè)計(jì)來著,怕有突變沒敢這么設(shè)計(jì)。我接下來該怎么辦?求解答。! 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
新蟲 (小有名氣)
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直接按照NCBI設(shè)計(jì),用高保真酶擴(kuò)增后連T載體測(cè)序看看就可以,如果有個(gè)別突變可以后面 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
新蟲 (正式寫手)
新蟲 (初入文壇)
新蟲 (初入文壇)
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