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vegence新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
基因克隆求助��！
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現(xiàn)在情況是我要克隆某基因cDNA序列，已知的是有該基因的cDS序列（3400bp）信息（師姐之前分段測(cè)序得出），我想克隆包括cds序列以及5’和3'非編碼區(qū)的cDNA全長(zhǎng)，以CDS序列為模板分段設(shè)計(jì)了兩對(duì)引物，第一對(duì)引物的下游和第二對(duì)引物的上游互補(bǔ)，想用重組PCR方法擴(kuò)出大部分cds序列（5'端和3'端各有50bp左右因不好設(shè)計(jì)引物，沒(méi)在擴(kuò)增范圍內(nèi)），我想問(wèn)的是我這個(gè)思路對(duì)不對(duì)，接下來(lái)該怎么辦？另外在NCBI上有預(yù)測(cè)的該基因的mRNA序列，之前也想用這個(gè)直接設(shè)計(jì)來(lái)著，怕有突變沒(méi)敢這么設(shè)計(jì)。我接下來(lái)該怎么辦？求解答�。�！ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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2樓2018-03-18 20:17:09
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3樓2018-03-18 21:15:31
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4樓2018-03-18 21:31:12
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直接按照NCBI設(shè)計(jì)，用高保真酶擴(kuò)增后連T載體測(cè)序看看就可以，如果有個(gè)別突變可以后面 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
5樓2018-03-18 21:52:09
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好的，謝謝你，還有一個(gè)問(wèn)題，就是設(shè)計(jì)引物時(shí)候，5’和3’兩端的引物不好設(shè)計(jì)，條件總是達(dá)不到要求該咋辦。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
6樓2018-03-19 07:52:12
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7樓2018-03-19 09:13:45
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這種情況可以先設(shè)計(jì)一下可擴(kuò)增的區(qū)域，如果5'和3'端剩余區(qū)域不是特別長(zhǎng)，可以再設(shè)計(jì)一對(duì)外部引物搭上去，實(shí)在不行可以合成 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
8樓2018-03-19 09:16:14
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