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vegence新蟲 (初入文壇)
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[求助]
基因克隆求助！！
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現(xiàn)在情況是我要克隆某基因cDNA序列，已知的是有該基因的cDS序列（3400bp）信息（師姐之前分段測序得出），我想克隆包括cds序列以及5’和3'非編碼區(qū)的cDNA全長，以CDS序列為模板分段設(shè)計了兩對引物，第一對引物的下游和第二對引物的上游互補，想用重組PCR方法擴出大部分cds序列（5'端和3'端各有50bp左右因不好設(shè)計引物，沒在擴增范圍內(nèi)），我想問的是我這個思路對不對，接下來該怎么辦？另外在NCBI上有預測的該基因的mRNA序列，之前也想用這個直接設(shè)計來著，怕有突變沒敢這么設(shè)計。我接下來該怎么辦？求解答！�。� 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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這種情況可以先設(shè)計一下可擴增的區(qū)域，如果5'和3'端剩余區(qū)域不是特別長，可以再設(shè)計一對外部引物搭上去，實在不行可以合成 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2018-03-19 09:16:14
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