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梧桐柒夕主管區(qū)長 (文壇精英)
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[求助]
質(zhì)粒PCR產(chǎn)物片段大小問題 已有3人參與
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| 質(zhì)粒為pUC57的大腸桿菌，質(zhì)粒提取用的是自制試劑盒，經(jīng)電泳過后確定是pUC57，然后用的是50μl的Taq體系進(jìn)行的PCR擴(kuò)增，引物自設(shè)的，將產(chǎn)物進(jìn)行電泳時(shí)發(fā)現(xiàn)有兩種不同的情況。其一是得到了400+的片段（此片段為正常片段），但同時(shí)做的相關(guān)平行組還得到了6000左右的片段。有沒有相關(guān)PCR通透者可以解釋一下，這個(gè)6000左右的片段會(huì)產(chǎn)生的原因？以及這個(gè)6000的片段是否正常？ |
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hailunl
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8樓2014-06-08 23:15:46
hailunl
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有非特異性很正常，PCR不能說明問題。 例如，引物特異性不好，或者退火溫度過低，延伸時(shí)間過長都會(huì)出現(xiàn)非特異性條帶， 只要有目標(biāo)條帶就可以了。 如果你想再檢測，建議提高退火溫度，質(zhì)粒為模板，退火溫度高點(diǎn)沒事；延伸時(shí)間掌控在目標(biāo)條帶范圍；另外，模板稀釋10倍或50倍。 |
2樓2014-06-08 19:11:00
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3樓2014-06-08 19:35:27
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4樓2014-06-08 21:52:47
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