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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 核酸提取 » DNA不溶解怎么辦？
| 查看: 9142 | 回復: 18 | ||||
fenheyue銀蟲 (小有名氣)
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DNA不溶解怎么辦？ 已有9人參與
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| 各位大俠好，半個月前我收到國外寄過來的DNA樣品，是用乙酸鈉和乙醇沉淀的。我離心后放在通風廚里晾干了2個小時，然后用dd水溶解，可是都融了半個月了，還有很多DNA沒有溶解，我該怎么辦呢？？？我曾試過53°加熱促進溶解，但是基本上沒有效果。 |
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【答案】應助回帖
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吃過藕粉沒？ 或者你試過把agarose粉末加到熱水，或者已經(jīng)煮化的膠里面么？ 這種agarose，哪怕你煮上七七四十九天，也不見得溶解 這就是為什么過干的核酸不利于溶解的一個類似現(xiàn)象 核酸作為多聚物，你讓它干透了，再加水，外面的一層溶解了，但是作為多聚物，又離不開那一團，不離開，里面的又接觸不到水，何談溶解？ agarose粉末直接到熱水，外面的一層很快溶解糊化，形成一層防水層，里面的再也接觸不到水了 而在冷水里面，水還有時間滲透到顆粒里面的，這樣就可以都溶解了。 所以你這個情況提高鹽濃度估計難以奏效。 我建議你加點堿試試，把NaOH的終濃度加到8 mM，8 mM的NaOH pH~9，不影響DNA的穩(wěn)定性。溶解之后也很容易用Tris或者HEPES buffer調(diào)回來。 堿性環(huán)境有利于DNA溶解，相當于提高了溶解度。 另外，很有效的一個方法，物理破壞，你用槍頭去戳那段沉淀，盡量把它搞小，增加接觸面積。 |
18樓2014-04-25 18:08:36
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10樓2014-04-24 11:48:43
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