SDS-PAGE泳道形狀詭異
跑SDS-PAGE把細(xì)胞裂解液上樣結(jié)果跑出來這么奇怪的形狀(最右邊兩個(gè)泳道)
我可以保證不是膠制備的問題, 換了好幾塊膠了
上樣的時(shí)候其他的泳道都沒問題,就是只要把這個(gè)細(xì)胞裂解液加上去,對(duì)應(yīng)的泳道就肯定就跑成這鬼樣子
電解緩沖液也沒問題, 實(shí)驗(yàn)室其他人拿我配的緩沖液跑都沒事
大概就是這裂解液樣品的問題....請(qǐng)問這是不是鹽濃度太高了?還是鹽濃度太低了?我這里面還有少量NP-40,不應(yīng)該影響吧？大概還會(huì)殘留一些養(yǎng)細(xì)胞用的MEM...
見了鬼了，按理說我這緩沖液最多只是PBS
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
這位同學(xué)，你的上樣量太大了的結(jié)果，可以把你的樣品先稀釋一下再上樣。先稀釋5倍看看吧，不行的話少上一點(diǎn)，上樣量蛋白太多了。
上樣量太大，或者把裂解液過濾純化下再電泳。
你試試離心取上清上樣
樣品制備的問題，不是跑膠的問題，建議重新做樣品再跑膠看看
上樣量太大，逐步兩倍的稀釋一下，跑一下就知道了
樓主的樣品電泳時(shí)不僅帶非常寬甚至可以說是彌散，所以不可能是段春上樣過多的問題，樣品處理的也不好。電壓也可考慮調(diào)整。
1.樣品處理（充分溶解樣品）：根據(jù)樣品分離目的不同，在上樣前對(duì)樣品進(jìn)行的溶解處理主要有三種處理方法：還原SDS處理、非還原SDS處理、帶有烷基化作用的還原SDS處理。
（1）還原SDS處理：在上樣buffer中加入SDS和DTT(或Beta巰基乙醇)后，蛋白質(zhì)構(gòu)象被解離，電荷被中和，形成SDS與蛋白相結(jié)合的分子，在電泳中，只根據(jù)分子量來分離。一般電泳均按這種方式處理，樣品稀釋適當(dāng)濃度，加入上樣Buffer，離心，沸水煮5min，再離心加樣。
（2）帶有烷基化作用的還原SDS處理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并經(jīng)久牢固的保護(hù)SH基團(tuán)，得到較窄的譜帶;另碘乙酸胺可捕集過量的DTT，而防止銀染時(shí)的紋理現(xiàn)象。100μl樣品緩沖液中10μl 20%的碘乙酸胺，并在室溫保溫30min。
（3）非還原SDS處理：生理體液、血清、尿素等樣品，一般只用1%SDS沸水中煮3min，未加還原劑，因而蛋白折疊未被破壞，不可作為測定分子量來使用。
2.保持各種蛋白質(zhì)樣品和Marker在上樣前能夠充分溶解，上樣前最好離心一下，實(shí)在溶解不掉的顆粒就去掉。
3.減少上樣量，樓主的樣品應(yīng)該稀釋十倍后再上樣。
4.可以考慮加高電泳時(shí)，濃縮膠的電壓為90-100 V，分離膠的電壓到120V-200V，；濃縮膠和分離膠有時(shí)候可能都設(shè)成150 V也能電泳成功。
5.上樣前要煮沸樣品蛋白質(zhì)，