通過Gibson組裝，你如果想兩個基因共用一個啟動子，第二個基因ATG和前一個基因TAA之間記得加上RBS；如果各自帶啟動子，擴增出載體，基因1和啟動子，基因2和啟動子后三個片段組裝。

引用回帖:

5樓: Originally posted by yuzhongbaihe at 2020-07-11 22:19:09
我們是想把2個殺蟲蛋白構建到自己改造的一個載體上，所以第2種方法肯定不能用了，第一種方法我還是不太理解呢，我這兩個基因都是3000多bp的，肯定不能全部都克隆上去？能給再說的具體些嗎？
...

（1）想把兩個蛋白同時表達在一起（表達成一個融合蛋白），這個可以加linker可以實現(xiàn)
（2）如果兩個蛋白表達出來，在第一個蛋白TAA結尾，第二個蛋白ATG開頭，原來是TAA ATG， 可以縮為 TAA TG，這樣ribosome在中止第一個閱讀框后，馬上遇到起始子ATG，繼續(xù)進行翻譯
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我之前用duet系列質粒表達了5個基因，分別插入不同的MSC中，比串聯(lián)表達好多了

我們是用之前實驗室從pet21b改造過的質粒來做，實驗室也沒有做的，所以有點不知道該從哪個方面下手