重組酶酶活測定
使用pGEX-4T-1載體與我的目的基因重組，在大腸BL21中表達(dá)我的酶，破碎后去上清，測酶活，現(xiàn)象非常奇怪，上清與底物混合后不用反應(yīng)就可以得到產(chǎn)物，而且滅活組是沒有的，跑了SDS-PAGE在目的區(qū)太多雜蛋白無法區(qū)分，想問問大家這個(gè)上清中有沒有可以某種物質(zhì)可以與我的底物反應(yīng)，而不是蛋白同時(shí)又可以降解我的底物
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這個(gè)問題的一個(gè)更好的對照是：表達(dá)空質(zhì)粒，破菌離心后取上清做同樣的實(shí)驗(yàn)。
如果大腸桿菌中也有同功能的酶，也是有可能的，看催化的是什么反應(yīng)，如果是核酸酶，或者保守的代謝酶，可能性就大了，
質(zhì)粒上也有蛋白的，如青霉素水解酶，如果表達(dá)的是內(nèi)酰胺酶，然后不表達(dá)，也能降解你的產(chǎn)物，