qPCR檢測限為什么不是拷貝數(shù)/反應，而是拷貝數(shù)/mL
目前看到的關于新冠等核酸檢測試劑盒標明的檢測限都是“拷貝數(shù)/mL”，這是怎么測出來的，看了很多文章都說是利用已知濃度的病毒顆�；蛸|粒十倍稀釋后看最低能檢測到的拷貝數(shù)，并沒有寫明詳細做法。不理解的是，為什么檢測限不以“拷貝數(shù)/反應”來表示，比如1000拷貝/mL的樣品1mL，模板加10μL和1μL肯定是不一樣的，所以這個1000拷貝/mL表示一個反應能檢測到多少呢。如果我們自己設計qPCR反應，檢測限應該達到多少個拷貝/反應才是合適的呢，自己做實驗的時候500個拷貝/反應的ct值就已經36了，是哪里的問題呢
返回小木蟲查看更多
今日熱帖
京公網安備 11010802022153號
i
。
cp/ml是以初始樣本計算的，做得好的，可以做到100cp/ml。
然后取200μl樣本，也就是取到了20個cp，經過核酸提取，回收率一般30~70%，還剩6~14 cp。
洗脫體積50，算上蒸發(fā)，剩余30μl 核酸，如果上樣20μl，就是4~9 cp。
那么對應PCR部分不計算提取的檢出限就是4~9 cp/PCR
。
老師您好，謝謝您的回答，很好奇qPCR真能做到10 copy/反應啊，我平時做實驗挺粗放，沒有做過這么細。我現(xiàn)在做到500copy/反應的Ct值就已經34、35了，請問這個原因是什么呢，是因為引物設計的不夠好嗎。我的擴增效率用sybrgreen染料法測，計算下來是90%，應該也還行啊。期待您的回復
，