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G號糖木蟲 (正式寫手)
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[求助]
請教pcr電泳方面問題 已有1人參與
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最近做了一般pcr，結(jié)果電泳圖感覺不行，想請教分析哈原因。如圖，基因擴增片段大概1000bp,所以最下方是什么條帶？怎么避免呢 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2016-02-27 16:55:18
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The bands less than 100bp in size were primer dimers or RNA contaminations. When you extract DNA, treat the pellets with TE containing RNaseA at 37 degrees Celsius for 1 hour. When you amplify the target genes, use less primers and higher annealing temperature. By the way, set the positive and negetive controls on every experiment, which is really helpful to find out the carrier. 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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G號糖3樓2016-02-27 19:08:46
G號糖
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4樓2016-02-27 22:24:49
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5樓2016-02-28 13:21:16
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6樓2016-03-01 03:52:23
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首先，最下方的是二聚體，PCR常見的問題，因為用酶不當，酶的特異性靈敏度不高，配置體系雖然在冰上也難以避免產(chǎn)生二聚體（可以用熱啟動Taq酶，可以先了解一下原理） 其次，膠濃度是多少，marker好像沒有分離開，， 最后，你的目的片段出來了嗎。。。應該沒有出來吧，上方最亮的那條帶應該不是目的條帶 吧，，，， PCR標準操作流程： http://www.detaibio.com/topics/pcr-sop.html 熱啟動Taq酶的原理： http://wenku.baidu.com/link?url=MdqQTlGAtQFbBE3HCutlKDyS_iNwkJkMLeiIheIMFjVGuMGxE_sykvWv9zNYSAHtZmOt_kWuxFIMe6hjfoEt6D60-TBn_KAEF2NJnh03ORK |
7樓2016-03-09 09:09:14
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