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關于體外轉(zhuǎn)錄前DNA質(zhì)粒模板的線性化
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最近在做感染性克隆相關的實驗，已經(jīng)構件好了DNA模版，下一步進行體外轉(zhuǎn)錄，之后轉(zhuǎn)染細胞，有幾個問題不太清楚： 1 在線性化酶切DNA模版鏈前，DNA模版質(zhì)粒的濃度要達到多少（微克/微升）轉(zhuǎn)錄效果比較好？ 2 一般正常體系酶切需要多長時間可以保證質(zhì)粒充分切割？ 3 很多體外轉(zhuǎn)錄試劑盒（mMESSAGE mMACHINE® Kit/MEGAscript® Kit）的說明書上介紹，酶切質(zhì)粒之后需要加入EDTA，醋酸銨和乙醇等試劑來終止酶切，之后離心去上清濃縮質(zhì)粒再用dH2O或TE buffer，請問做過相關實驗的朋友在實驗中是否這樣處理了呢？ |
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2樓2017-09-15 12:35:16
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