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淺跚潮末新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于體外轉(zhuǎn)錄前DNA質(zhì)粒模板的線性化
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最近在做感染性克隆相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，已經(jīng)構(gòu)件好了DNA模版，下一步進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄，之后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，有幾個(gè)問題不太清楚： 1 在線性化酶切DNA模版鏈前，DNA模版質(zhì)粒的濃度要達(dá)到多少（微克/微升）轉(zhuǎn)錄效果比較好？ 2 一般正常體系酶切需要多長(zhǎng)時(shí)間可以保證質(zhì)粒充分切割？ 3 很多體外轉(zhuǎn)錄試劑盒（mMESSAGE mMACHINE® Kit/MEGAscript® Kit）的說明書上介紹，酶切質(zhì)粒之后需要加入EDTA，醋酸銨和乙醇等試劑來終止酶切，之后離心去上清濃縮質(zhì)粒再用dH2O或TE buffer，請(qǐng)問做過相關(guān)實(shí)驗(yàn)的朋友在實(shí)驗(yàn)中是否這樣處理了呢？ |
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餓的神啊
新蟲 (著名寫手)
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2樓2017-09-15 12:35:16
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