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hotta614新蟲(chóng) (初入文壇)
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細(xì)胞培養(yǎng) 已有1人參與
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hotta614: 金幣+10, good 2016-03-03 12:30:50
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| 頂 |
2樓2016-03-03 12:29:52
lansexuanwo
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 86.6
- 帖子: 15
- 在線: 18.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 4382202
- 注冊(cè): 2016-01-26
- 專(zhuān)業(yè): 基因表達(dá)調(diào)控與表觀遺傳學(xué)
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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細(xì)胞培養(yǎng) 一、復(fù)蘇 1.把凍存管從液氮中取出來(lái)，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動(dòng)。液體都融化后（大概1-1.5分鐘），拿出來(lái)噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺(tái)里。 2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中（用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來(lái)），1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。 3.把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來(lái)。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動(dòng)，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。 4.標(biāo)好細(xì)胞種類(lèi)和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。 5.3天換一次培養(yǎng)基。 二、傳代 1.培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。 2.把原有培養(yǎng)基吸掉或倒掉，用PBS洗一次。 3.加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌福芨采w細(xì)胞就行），消化1-2分鐘。 4.細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。 5.用移液槍吹打細(xì)胞，把細(xì)胞都懸浮起來(lái)。 6.把細(xì)胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。 7.倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細(xì)胞都吹起來(lái)。 8.根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中。一般，癌細(xì)胞分5個(gè)，正常細(xì)胞傳3個(gè)。繼續(xù)培養(yǎng)。 三、凍存 把細(xì)胞消化下來(lái)并離心（同上）。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來(lái)，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫(xiě)明細(xì)胞種類(lèi)，凍存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃過(guò)夜，然后放到液氮灌中保存。 凍存液的配制： 70%的完全培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。 |
3樓2016-03-04 11:16:16
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