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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 細胞科學 » 細胞培養(yǎng)
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hotta614新蟲 (初入文壇)
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hotta614: 金幣+10, good 2016-03-03 12:30:50
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| 頂 |
2樓2016-03-03 12:29:52
lansexuanwo
新蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 86.6
- 帖子: 15
- 在線: 18.3小時
- 蟲號: 4382202
- 注冊: 2016-01-26
- 專業(yè): 基因表達調(diào)控與表觀遺傳學
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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細胞培養(yǎng) 一、復蘇 1.把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化后（大概1-1.5分鐘），拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。 2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中（用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來），1000轉離心5分鐘。 3.把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動，使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布。 4.標好細胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細胞貼壁后換培養(yǎng)基。 5.3天換一次培養(yǎng)基。 二、傳代 1.培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。 2.把原有培養(yǎng)基吸掉或倒掉，用PBS洗一次。 3.加適當?shù)囊鹊鞍酌福芨采w細胞就行），消化1-2分鐘。 4.細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。 5.用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來。 6.把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉離心5分鐘。 7.倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細胞都吹起來。 8.根據(jù)細胞種類把細胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。 三、凍存 把細胞消化下來并離心（同上）。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細胞種類，凍存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。 凍存液的配制： 70%的完全培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。 |
3樓2016-03-04 11:16:16
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