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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 蛋白電泳/WB » 新手關于WB的問題~
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[求助]
新手關于WB的問題~ 已有1人參與
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本人新手第一次做WB實驗，有幾個小問題，希望大家能解答下。 在做細胞提取的時候裂解液用的RIPA,而我測蛋白濃度用的是BRADFORD方法，我后來看說RIPA因為有SDS（我用的是濃度0.1%）不適合做Bradford法。我想問下如果我想用Bradford法，那么裂解液應該如何配？ 第二個是用Bradford法，為何要稀釋蛋白樣本的濃度，我第一次測的時候是測的純量，沒稀釋，但是老師說我這個濃度太高，測不出來，要我稀釋，但是我不太明白，怎么能看出來是濃度高，稀釋的比例選多少合適呢？我們用的儀器，直接可以讀出來UNKNOW 樣本的濃度，然后在跑膠的時候，我需要保證每孔的蛋白質質量是一樣的，那么我就需要保證我不同樣本量蛋白濃度是一樣的，老師給我的是2微克/微升，那么這個濃度有什么根據(jù)么，范圍是在多少之內算合適的？ 第三是，我在最后拍照的時候，第一次曝光2分鐘，是一片白的，相片上什么都沒有，第二次曝光30分鐘 是黑的一片，隱約能看見結果。我想問過黑或者過白是為什么？這個曝光時間該怎么掌握。。。 謝謝大家。。。因為在國外讀博，有時候感覺老師解釋的也不是很清楚。。。也可能是我理解能力不夠。。。第一次WB做的感覺懵懵懂懂，似乎懂了，細想一下又一堆問題。。。 |
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感謝參與，應助指數(shù) +1
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2樓2016-03-06 10:18:08
3樓2016-03-09 01:04:52
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