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8128sherry新蟲 (初入文壇)
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[求助]
新手關(guān)于WB的問題~ 已有1人參與
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本人新手第一次做WB實(shí)驗(yàn)，有幾個(gè)小問題，希望大家能解答下。 在做細(xì)胞提取的時(shí)候裂解液用的RIPA,而我測(cè)蛋白濃度用的是BRADFORD方法，我后來(lái)看說(shuō)RIPA因?yàn)橛蠸DS（我用的是濃度0.1%）不適合做Bradford法。我想問下如果我想用Bradford法，那么裂解液應(yīng)該如何配？ 第二個(gè)是用Bradford法，為何要稀釋蛋白樣本的濃度，我第一次測(cè)的時(shí)候是測(cè)的純量，沒稀釋，但是老師說(shuō)我這個(gè)濃度太高，測(cè)不出來(lái)，要我稀釋，但是我不太明白，怎么能看出來(lái)是濃度高，稀釋的比例選多少合適呢？我們用的儀器，直接可以讀出來(lái)UNKNOW 樣本的濃度，然后在跑膠的時(shí)候，我需要保證每孔的蛋白質(zhì)質(zhì)量是一樣的，那么我就需要保證我不同樣本量蛋白濃度是一樣的，老師給我的是2微克/微升，那么這個(gè)濃度有什么根據(jù)么，范圍是在多少之內(nèi)算合適的？ 第三是，我在最后拍照的時(shí)候，第一次曝光2分鐘，是一片白的，相片上什么都沒有，第二次曝光30分鐘 是黑的一片，隱約能看見結(jié)果。我想問過黑或者過白是為什么？這個(gè)曝光時(shí)間該怎么掌握。。。 謝謝大家。。。因?yàn)樵趪?guó)外讀博，有時(shí)候感覺老師解釋的也不是很清楚。。。也可能是我理解能力不夠。。。第一次WB做的感覺懵懵懂懂，似乎懂了，細(xì)想一下又一堆問題。。。 |
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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2樓2016-03-06 10:18:08
8128sherry
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 256.8
- 帖子: 38
- 在線: 9.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 3590291
- 注冊(cè): 2014-12-12
- 專業(yè): 糖尿病
3樓2016-03-09 01:04:52
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