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呂木木新蟲 (小有名氣)
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[求助]
PCR程序 已有2人參與
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我要克隆1900bp的片段，用的GXL酶，反應(yīng)體系是：模板1微升，5×GXL Buffer5微升，MIXdNTP 2微升，引物1微升，酶0.5微升，ddH2O至25微升。 對(duì)應(yīng)程序：94℃30 s，72℃ 2 min，5 個(gè)循環(huán)；94℃ 30 s，（溫度梯度）70℃ 40 s， 72℃ 2 min，5 個(gè)循環(huán)；94℃ 30 s，（溫度梯度）68℃ 40 s，72℃ 2 min，30 個(gè)循環(huán)；72℃ 10 min，4℃保存，但是一直跑不出來，什么條帶都沒有，跑了一個(gè)學(xué)期了，請(qǐng)問怎么修改程序或體系，溫度梯度怎么設(shè)置？ |
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2樓2016-03-05 21:22:16
sandycool
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3樓2016-03-05 21:58:48
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現(xiàn)在有takara的兩個(gè)反轉(zhuǎn)錄試劑盒，一個(gè)是primescript 1st cDNA 試劑盒，另外一個(gè)是去除gDNA的試劑盒，不知道用哪個(gè)更好 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-03-05 22:01:27
呂木木
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5樓2016-03-05 22:10:19
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6樓2016-03-05 22:11:05
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7樓2016-03-05 22:12:00
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請(qǐng)問是takara的哪一款？有一個(gè)除基因組DNA的，有一個(gè)是1st strand synthesis，具體是哪一款？謝謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2016-03-05 22:17:16
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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不要盲目相信前輩啦，基因不一樣的話，如果長度不一樣，延伸時(shí)間就不一樣，退火溫度也不同，問題還可能出現(xiàn)在引物上，我覺得你可以看看酶的說明書，按上面的來。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
9樓2016-03-05 22:29:59
呂木木
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10樓2016-03-05 22:42:59
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