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高拷貝質(zhì)粒變成低拷貝，可能嗎？！ 已有1人參與
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最近用pGEM T-easy 構(gòu)建了一個(gè)載體（在多克隆位點(diǎn)區(qū)插入大約4kb片段），總長度大約7KB，這個(gè)載體轉(zhuǎn)入DH5a能狗很好的提取質(zhì)粒，，5ML菌液可以提取50ul質(zhì)粒，濃度達(dá)到468ng/ul， 實(shí)驗(yàn)室用的是OMEGA 質(zhì)粒小提盒子，可是當(dāng)我雙酶切插入GFP（大約800bp）， 獲得陽性克隆，提取質(zhì)粒的時(shí)候遇到問題了，，質(zhì)粒卻成了低拷貝，用5ml菌液最后濃度才10ng/ul, 我跟空載體同時(shí)做，發(fā)現(xiàn)空載體可以提的很好 （說明試劑盒沒有問題），就是插入片段的質(zhì)粒菌，濃度很低。這是什么原因？ 推測：質(zhì)粒太長？！不太可能 DH5a菌株有問題？造成裂解有問題？！ |
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3樓2016-03-11 10:02:19
ken19860823
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 21 (小學(xué)生)
- 金幣: 3574.2
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- 蟲號: 3150033
- 注冊: 2014-04-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 免疫生物學(xué)
2樓2016-03-11 08:10:36
ken19860823
木蟲 (正式寫手)
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4樓2016-03-11 12:12:47
5樓2016-03-15 02:59:41
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