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高拷貝質(zhì)粒變成低拷貝,可能嗎?! 已有1人參與
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最近用pGEM T-easy 構(gòu)建了一個載體(在多克隆位點區(qū)插入大約4kb片段),總長度大約7KB,這個載體轉(zhuǎn)入DH5a能狗很好的提取質(zhì)粒,,5ML菌液可以提取50ul質(zhì)粒,濃度達到468ng/ul, 實驗室用的是OMEGA 質(zhì)粒小提盒子,可是當我雙酶切插入GFP(大約800bp), 獲得陽性克隆,提取質(zhì)粒的時候遇到問題了,,質(zhì)粒卻成了低拷貝,用5ml菌液最后濃度才10ng/ul, 我跟空載體同時做,發(fā)現(xiàn)空載體可以提的很好 (說明試劑盒沒有問題),就是插入片段的質(zhì)粒菌,濃度很低。這是什么原因? 推測:質(zhì)粒太長?!不太可能 DH5a菌株有問題?造成裂解有問題?! |
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