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i760912798木蟲 (正式寫手)
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[交流]
ET/Red重組系統(tǒng) 已有2人參與
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| 使用ET/Red重組系統(tǒng)，擴(kuò)增同源重組片段，連T載體后測序驗證，同源臂序列突變很多，是怎么回事，怎樣避免同源臂突變呢？如果無法避免同源臂序列突變，突變幾個不影響同源重組效率呢？ |
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你這是要用Red重組敲除目的基因嗎？之前我做過敲除，同源臂擴(kuò)增后直接用于同源重組，并沒有再進(jìn)行測序。只要你的同源臂在40-60bp左右，重組應(yīng)該沒問題。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-03-13 09:53:12
i760912798
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我也是首次利用red重組系統(tǒng)敲除基因，已經(jīng)1個多月了，一點(diǎn)進(jìn)展也沒有，就是卡到重組片段上了。你用普通taq酶擴(kuò)增重組片段后就成功了缺失基因了，你是怎么做到的？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2016-03-13 11:29:46
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其實 重組不成功原因很多，比如你感受態(tài)做的不好，或者轉(zhuǎn)化方法不當(dāng)?shù)取?br />
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7樓2016-03-13 11:34:44
wang2568
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3樓2016-03-13 10:07:53
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我用的是長引物擴(kuò)增同源臂和抗性基因的，用的是普通的taq酶，連T載體測序，同源臂有突變，將pcr產(chǎn)物直接電轉(zhuǎn)后涂板也沒有克隆長出，你們用的同源臂多大，用什么酶擴(kuò)的，存在突變嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-03-13 10:55:50
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8樓2016-03-13 11:47:42
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9樓2016-03-13 11:52:31
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10樓2016-03-13 11:55:02
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