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i760912798木蟲 (正式寫手)
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[交流]
ET/Red重組系統(tǒng) 已有2人參與
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| 使用ET/Red重組系統(tǒng)，擴(kuò)增同源重組片段，連T載體后測(cè)序驗(yàn)證，同源臂序列突變很多，是怎么回事，怎樣避免同源臂突變呢？如果無(wú)法避免同源臂序列突變，突變幾個(gè)不影響同源重組效率呢？ |
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安靜de執(zhí)著14
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9樓2016-03-13 11:52:31
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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你這是要用Red重組敲除目的基因嗎？之前我做過敲除，同源臂擴(kuò)增后直接用于同源重組，并沒有再進(jìn)行測(cè)序。只要你的同源臂在40-60bp左右，重組應(yīng)該沒問題。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-03-13 09:53:12
wang2568
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3樓2016-03-13 10:07:53
i760912798
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我用的是長(zhǎng)引物擴(kuò)增同源臂和抗性基因的，用的是普通的taq酶，連T載體測(cè)序，同源臂有突變，將pcr產(chǎn)物直接電轉(zhuǎn)后涂板也沒有克隆長(zhǎng)出，你們用的同源臂多大，用什么酶擴(kuò)的，存在突變嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-03-13 10:55:50
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