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柚小西新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
酵母感受態(tài)電轉(zhuǎn)陰性對(duì)照長(zhǎng)出轉(zhuǎn)化子的問(wèn)題 已有1人參與
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各位大牛，事情是這樣的: 我制備了畢赤酵母SMD1168的感受態(tài)， 將重組的α-amylase電轉(zhuǎn)進(jìn)畢赤酵母。然而，操作了兩次發(fā)現(xiàn)，陰性對(duì)照，即SMD1168感受態(tài)不論是電轉(zhuǎn)后凃板還是直接凃板，都長(zhǎng)出了轉(zhuǎn)化子（奔潰中。。。 ） ，涂布的是MD板， 想著不太可能啊， 因?yàn)楦惺軕B(tài)里面根本沒(méi)有his標(biāo)記，怎么可能長(zhǎng)出轉(zhuǎn)化子呢， 會(huì)不會(huì)是MD板制備中的某些成分失效了？ MD板配方（100ml）：1g甘油、1.5g瓊脂，90ml ddH2O。121℃滅菌20min后加入事先過(guò)濾除菌的200ul生物素和10ml的YNB. 第二次制備感受態(tài)中， 涂布電轉(zhuǎn)后的SMD1168時(shí)，使用了新制備的MD板和半年前配好的MD板涂布， 結(jié)果：新板長(zhǎng)出了轉(zhuǎn)化子，舊板沒(méi)有長(zhǎng)轉(zhuǎn)化子。 請(qǐng)問(wèn)如何解釋呢。好崩潰。。。。 |
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～微～
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4樓2017-05-17 23:44:41
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2樓2016-04-21 17:10:25
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【答案】應(yīng)助回帖
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你的配方跟我的不一樣啊 *MD，MDH (minimal dextrose medium±histidine) 1L 1.34% YNB 4×10-5%生物素2%葡萄糖 1 滅菌800ml 水 2 于60 度下加入100ml 10×YNB，2ml 500×B, 100ml 10×D 3 制MDH 時(shí)，加入10ml 100×H,混勻存于4 度 4 如制備平板，于第一步加入15g瓊脂粉 5 倒置平板，4 度放置幾個(gè)月 1.確定你的培養(yǎng)基各個(gè)組分沒(méi)有受到蛋白胨，酵母粉等的污染，重新按照上述配方配制MD。 2.需要確定你的SMD1168是不是有問(wèn)題：分別劃板MD,YPD（倒平板時(shí)加點(diǎn)氨芐和卡那，防止E.coli的污染。） 如果MD長(zhǎng)了，就是你的SMD1168有問(wèn)題唄。 |
3樓2016-04-22 11:08:07
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