 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 2/1 | 返回列表 |
| 查看: 10157 | 回復(fù): 17 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[交流]
載體、目的基因雙酶切、連接問題 已有17人參與
|
|||
各位大俠，幫我分析下PET-28a載體上用BamH I、Sal I酶切能切開嗎？，序列見圖。兩個(gè)位點(diǎn)相差13bp，還有我在目的基因上設(shè)計(jì)酶切引物，引物前方只加了三個(gè)保護(hù)性堿基，這樣子行不？我連接了好久了都沒連接上。我用的酶是TAKARA的，按照公司推薦的載體切2-3小時(shí)，800多bp的目的切2小時(shí)。兩個(gè)酶buffer不一樣，有10xT的公用buffer，反應(yīng)溫度也不一樣，BamH I30℃，Sal I37℃，按照takara推薦的公用buffer以及37℃酶切，直接雙酶切以及分步酶切都試過了，挑取的陽性克隆，提質(zhì)粒后與原始載體大小接近，目的基因未連接成功 ，有沒有什么方法能夠證明雙酶切切開了？1.png |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有138人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
korchagin
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 34 (小學(xué)生)
- 金幣: 2452.2
- 紅花: 1
- 帖子: 88
- 在線: 8.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1839328
- 注冊(cè): 2012-05-29
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
18樓2016-08-12 15:16:50
2樓2016-03-23 11:26:48
原海亮
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 232 (大學(xué)生)
- 金幣: 4607.4
- 散金: 3521
- 紅花: 33
- 帖子: 1804
- 在線: 375.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1392705
- 注冊(cè): 2011-09-06
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
xn8008: 金幣+1, 應(yīng)助指數(shù)+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-08-04 06:43:14
xn8008: 金幣+1, 應(yīng)助指數(shù)+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-08-04 06:45:11
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
xn8008: 金幣+1, 應(yīng)助指數(shù)+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-08-04 06:43:14
xn8008: 金幣+1, 應(yīng)助指數(shù)+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-08-04 06:45:11
|
空載載體的處理確實(shí)容易出現(xiàn)這樣情況，可以將回收后的載體重復(fù)二次酶切試試，保證酶切完全�；蛘呖梢哉覍�(shí)驗(yàn)室心里構(gòu)建好的pET+目的片段的載體，那它作為出發(fā)載體進(jìn)行雙酶切（當(dāng)然這個(gè)載體上保留著你需要的雙酶切位點(diǎn)），這樣你回收載體時(shí)候，就可以同過看有沒有目的條帶切出來，來判斷載體的酶切情況。第二，片段的處理，首先確定所選的酶為在目的片段里不存在，然后酶切處理同樣要求盡可能的酶切完全，很多人為了避免后面出現(xiàn)類似麻煩的事情，可以把pcr產(chǎn)物連接T載體，一方面可以送測(cè)序驗(yàn)證是否正確后，再安排接下來實(shí)驗(yàn)。另一方面，這樣做你酶切目的片段時(shí)候，就可以通過回收從T載體上切下來的片段進(jìn)行連接轉(zhuǎn)化，祝好！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2016-03-23 12:18:32
Bearxionghui
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 24.5
- 帖子: 4
- 在線: 3.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 3826780
- 注冊(cè): 2015-04-22
- 性別: MM
4樓2016-03-24 21:44:23
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分，求調(diào)劑 +5 | 0857求調(diào)劑. 2026-03-24 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 315求調(diào)劑 +4 | akie... 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 071000生物學(xué)求調(diào)劑，初試成績343 +7 | 小小甜面團(tuán) 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +5 | 舊吢 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703本科鄭州大學(xué)求調(diào)劑 +3 | nhj_ 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +3 | 好好讀書。 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +5 | jhx777 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿211院校 344分 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生物學(xué)學(xué)碩，求調(diào)劑 +5 | 丶風(fēng)雪夜歸人丶 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +7 | 腳滑的守法公民 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉大071010，316分求調(diào)劑 +3 | xgbiknn 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +4 | 崔wj 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境專碩324分求調(diào)劑推薦 +5 | 軒小寧—— 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +4 | gajsj 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0854電子信息求調(diào)劑 +7 | α____ 2026-03-22 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 李李不服輸 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +3 | wcq131415 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 材料考研調(diào)劑生
+3
|
黃粱一夢(mèng)千年 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料/農(nóng)業(yè)專業(yè)，07/08開頭均可，過線就行 +3 | 呵唔哦豁 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 石河子大學(xué)（211、雙一流）碩博研究生長期招生公告 +3 | 李子目 2026-03-22 | 3/150 |
|