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新蟲 (初入文壇)

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專業(yè): 食品科學(xué)

[求助] 關(guān)于胰蛋白酶測(cè)定酶活的問題

這是我在文獻(xiàn)里找到的測(cè)胰蛋白酶的步驟，以BApNA為底物：
(1)試劑配制:
①1mol/LTris-HCl緩沖液(pH8.0): 稱取三經(jīng)甲基氨基甲燒(Tris) 121.14g,溶于900 mL水中,用濃鹽酸調(diào)pH值到8.0,加水用容量瓶定容至1L,4°C保存,用時(shí)稀釋 20 倍,制成 pH8.0、50mmol/L 的 Tris-HCl 緩沖液。
②BApNA底物溶液: 稱取0.0435g溶于10 mL 二甲基亞砜,4°C保存。
③10%三氯乙酸: 10g三氯乙酸,溶于100 mL去離子水,4°C保存
(2)測(cè)定步驟:
①將50微升酶液溶入1850微升緩沖液中,混合均勾,并在37攝氏度下預(yù)熱2min。
②向上述混合液中加入100微升底物(20mmol/L),在37°C下反應(yīng)20 min;
③反應(yīng)時(shí)間結(jié)束,向反應(yīng)體系中加入200微升三氯乙酸(10%)終止反應(yīng),對(duì)照管為預(yù)先先加入三氯乙酸(10%)破壞了酶活力的反應(yīng)體系。
④反應(yīng)液冷卻至室溫,在波長(zhǎng)為410nm的條件下測(cè)定其光吸收值。
每個(gè)樣品設(shè)一個(gè)對(duì)照,三個(gè)平行樣。我們將每秒鐘轉(zhuǎn)換1微摩爾底物BApNA所需的酶量定義為1個(gè)酶活力單位。
那么各位大神，測(cè)酶活的公式是什么？

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1樓 2016-03-23 10:34:22

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新蟲 (初入文壇)

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2樓2016-09-21 21:20:44