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zhushengsheng

木蟲 (著名寫手)

[交流] 請教一下用LC-MS進(jìn)行定量是內(nèi)標(biāo)如何選擇?

大家好,請教一下大家在做LC-MS定量時,這個內(nèi)標(biāo)是如何選擇的?

一般有哪些常用的內(nèi)標(biāo)物呢?

謝謝!
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stingdhk

鐵桿木蟲 (著名寫手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
zhushengsheng: 金幣+10 2016-03-26 16:34:55
最理想的是同位素內(nèi)標(biāo),但這個價格一般比較昂貴,購買比較麻煩
其次找和你的待測物結(jié)構(gòu)相近的
最次只能是湊一個保留時間合適,響應(yīng)穩(wěn)定的
也可以找一下相關(guān)文獻(xiàn)或者有用你的待測物作內(nèi)標(biāo)的文獻(xiàn),看文獻(xiàn)中都用的什么內(nèi)標(biāo)
有幾個據(jù)說是做LC/MS用的比較多的內(nèi)標(biāo),地塞米松,拉貝洛爾,阿普唑侖,普萘洛爾,柳氨酚,雙氯芬酸。當(dāng)然我也沒有試過,僅供參考哈
2樓2016-03-23 16:38:15
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王老吉

新蟲 (初入文壇)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
zhushengsheng: 金幣+10 2016-03-26 16:35:02
最好能用同位素的內(nèi)標(biāo),因為在方法學(xué)驗證時候基質(zhì)效應(yīng),化合物的生物樣品就算有基質(zhì)效應(yīng),計算時可以用相對基質(zhì)效應(yīng),但同位素內(nèi)標(biāo)比較昂貴,很多試劑公司不一定有貨。
一般我們常用的內(nèi)標(biāo)應(yīng)該滿足穩(wěn)定且結(jié)構(gòu)與待測化合物結(jié)構(gòu)相似,色譜行為也能接近的。但是如果找不到合適的,你也可以選擇比較常用的如安定(正離子),地塞米松(負(fù)離子)。
3樓2016-03-26 09:23:56
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zhushengsheng

木蟲 (著名寫手)

引用回帖:
2樓: Originally posted by stingdhk at 2016-03-23 16:38:15
最理想的是同位素內(nèi)標(biāo),但這個價格一般比較昂貴,購買比較麻煩
其次找和你的待測物結(jié)構(gòu)相近的
最次只能是湊一個保留時間合適,響應(yīng)穩(wěn)定的
也可以找一下相關(guān)文獻(xiàn)或者有用你的待測物作內(nèi)標(biāo)的文獻(xiàn),看文獻(xiàn)中都用的什 ...

謝謝您,看來問到專家了,再問您兩個問題:
1)請問用QQQ- LC-MS-MS定量,是不是兩個化合物不用分開也可以定量?沒有做過液質(zhì)聯(lián)用,看別人啊內(nèi)標(biāo)和待測物1,待測物2出峰時間都一樣,還是可以定量?說這個用離子對進(jìn)行定量,看質(zhì)譜的峰面積?

2)請問一下用試劑盒測定生物樣品中的血藥濃度,做藥代動力學(xué),這個方法要進(jìn)行方法學(xué)驗證么?
4樓2016-03-26 16:44:55
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stingdhk

鐵桿木蟲 (著名寫手)


小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
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4樓: Originally posted by zhushengsheng at 2016-03-26 16:44:55
謝謝您,看來問到專家了,再問您兩個問題:
1)請問用QQQ- LC-MS-MS定量,是不是兩個化合物不用分開也可以定量?沒有做過液質(zhì)聯(lián)用,看別人啊內(nèi)標(biāo)和待測物1,待測物2出峰時間都一樣,還是可以定量?說這個用離子對 ...

因為液質(zhì)主要是根據(jù)分子量定性定量的,所以可以不用完全分開的,而且用同位素內(nèi)標(biāo)一般情況下是分不開的,但是這種情況下方法學(xué)驗證的時候需要做一個交叉干擾來證明你的待測物和內(nèi)標(biāo)之間不會相互影響
一般藥代動力學(xué)都需要做方法學(xué)驗證的,試劑盒我沒用過,這個不太懂
5樓2016-03-27 09:13:42
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zhushengsheng

木蟲 (著名寫手)

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5樓: Originally posted by stingdhk at 2016-03-27 09:13:42
因為液質(zhì)主要是根據(jù)分子量定性定量的,所以可以不用完全分開的,而且用同位素內(nèi)標(biāo)一般情況下是分不開的,但是這種情況下方法學(xué)驗證的時候需要做一個交叉干擾來證明你的待測物和內(nèi)標(biāo)之間不會相互影響
一般藥代動力 ...

再請教您一個問題:
大家好,請教一下藥代動力學(xué)中采血時間點的選擇;

如果檢測方法的LLOQ是 1ng/mL, 半衰期是3小時; Tmax = 1小時;

采血時間點是: 0, 5min, 15min, 30min, 1h, 2h, 3h, 4h,5h, 6h, 8h, 10h, 12h, 18h, 24h;

進(jìn)行血藥濃度檢測的時候,發(fā)現(xiàn) 12h 的濃度為 30 ng/mL; 18h 的濃度為 8ng/mL, 24h時濃度為 2ng/mL,這個24小時的濃度還在LLOQ之上;

計算時采血到12小時的時候計算T1/2和;

采血終點設(shè)計為18小時的時候計算T1/2;

和采血到24小時的時候計算T1/2這個數(shù)據(jù)相差是蠻大的;

這種情況我的采血時間終點應(yīng)該設(shè)在哪個點呢?
6樓2016-03-28 10:50:22
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stingdhk

鐵桿木蟲 (著名寫手)


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6樓: Originally posted by zhushengsheng at 2016-03-28 10:50:22
再請教您一個問題:
大家好,請教一下藥代動力學(xué)中采血時間點的選擇;

如果檢測方法的LLOQ是 1ng/mL, 半衰期是3小時; Tmax = 1小時;

采血時間點是: 0, 15min, 30min, 1h, 1.5h, 3h, 4h, 6h, 12h, 18h,  ...

采血時間點要能滿足吸收相2-3個點,Cmax附近最少3個點,消除相4-6個點,采血時間持續(xù)3-5個半衰期。你這個采血時間點貌似不是特別合理。
計算的時候半衰期一般是采用末端幾個點的數(shù)據(jù)計算,如果采血到12h,就不能直接用你現(xiàn)在的數(shù)據(jù)取到12h計算,應(yīng)該需要相應(yīng)的增加12h之前的采血點吧?
7樓2016-03-28 12:19:17
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yigaozizi

新蟲 (初入文壇)


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跟帖學(xué)習(xí)中
加入內(nèi)標(biāo)物及系列目標(biāo)物進(jìn)空白血漿內(nèi),按照特定方法進(jìn)行前處理之后,獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線,這個曲線需要多久做一次?還是使用QC樣品進(jìn)行校正?怎么校正呢?提前謝謝大家!
8樓2016-03-28 14:11:00
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zhushengsheng

木蟲 (著名寫手)

引用回帖:
7樓: Originally posted by stingdhk at 2016-03-28 12:19:17
采血時間點要能滿足吸收相2-3個點,Cmax附近最少3個點,消除相4-6個點,采血時間持續(xù)3-5個半衰期。你這個采血時間點貌似不是特別合理。
計算的時候半衰期一般是采用末端幾個點的數(shù)據(jù)計算,如果采血到12h,就不能直 ...

哦,我知道加入我消除相的點足夠多的話;
0, 5min, 15min, 30min, 1h, 2h, 3h, 4h, 5h,6h,  8h, 10h, 12h, 18h, 24h;
這種情況,我能就算到12h么?
9樓2016-03-28 15:17:28
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stingdhk

鐵桿木蟲 (著名寫手)


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引用回帖:
9樓: Originally posted by zhushengsheng at 2016-03-28 15:17:28
哦,我知道加入我消除相的點足夠多的話;
0, 5min, 15min, 30min, 1h, 2h, 3h, 4h, 5h,6h,  8h, 10h, 12h, 18h, 24h;
這種情況,我能就算到12h么?...

理論上是可以的吧,具體怎么算的我也不太懂了
10樓2016-03-28 15:48:06
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