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晴紫蘭新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
求助ELISA�。�！
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ELISA菜鳥(niǎo)一枚，正在做ELISA,遇到問(wèn)題了，周?chē)鷽](méi)有人做，只好來(lái)小木蟲(chóng)求助各位大神了。 我做的是檢測(cè)乳粉的抗原性，現(xiàn)在在確定抗原的包被濃度，一抗和二抗的工作濃度。但是每次加入TMB后都沒(méi)有顯色。希望大神們幫忙分析一下有可能是什么原因。以下是我的實(shí)驗(yàn)步驟： 1、用包被液包被抗原（β-LG)，抗原濃度分別為0.5、2.5、10、25、50ug/ml,從左到右依次加入板中，100ul/孔，4℃過(guò)夜。 2、次日，用洗滌液洗板4次，甩干。 3、加封閉液進(jìn)行封閉，37℃放置45min。 4、洗滌 5、將兔抗β-LG用洗滌液從1:500對(duì)倍稀釋?zhuān)瑥纳系较乱来渭尤氚逯校?00ul/L，37℃溫育1h. 6、洗滌 7、將HRP-羊抗兔IgG用洗滌液稀釋?zhuān)尤?00ul/孔，37℃溫育1h。 8、洗滌 9、將等體積的TMB A液和B液混合，取100ul/孔加入板內(nèi)，37℃避光溫育。 ps:包被液：pH9.6 0.05mol/L碳酸鹽緩沖液 洗滌液：pH7.4 PBST 封閉液：PBS+1%BSA+0.1%Tween-20 希望大家多多幫助�。。�！ |
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晴紫蘭
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4樓2016-03-28 21:03:39
晴紫蘭
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5樓2016-03-29 08:39:32
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