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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 化學化工區(qū) » 分析 » 色譜質譜 » 液相色譜柱選擇
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液相色譜柱決定最終分離效果，所以在選擇色譜柱時候有必要考慮清楚自己的需求。 首先液相色譜柱目前來說分為正反相色譜柱，正相有SI等，反相有C18等。正相主要分離極性物質，反相主要分離非極性物質，氨基柱等主要分離二者之間的。 明確了色譜柱大概功能之后，確認下自己樣品信息，基本就有點眉目了，方向對了，剩下的事情就是細節(jié)了如：鍵合相、粒徑、孔徑、碳載量等 鍵合相：確定了正反相后基本就簡單了，正相很簡單，我們重點討論下反相，C18主要分離非極性和弱極性物質，因為是鍵合硅膠，所以C18也分好幾種有常規(guī)的如C18-A，耐純水的OL Apple C18-AQ、耐酸堿的OL Apple C18-EX等，如果發(fā)現(xiàn)C18保留很弱，調整流動相也不行，這個時候可以考慮C8甚至C4等。 粒徑：色譜法追求的是高效、高分辨、高速等。目前來說亞2um填料或者2UM核殼填料是很理想的模型，基本具備“三高”特征尤其是高速，線速度不在影響分離度，不過附帶的缺點就是高壓，要升級相應的硬件，成本高昂，需要謹慎考慮。 5um填料最普遍，目前來說完全可以勝任各種日常檢測，即使有特殊要求，3um色譜填料基本上也能全覆蓋，不過該模型下線速度和分離度是成反比的。 孔徑：目前很多60~300A都有，甚至更高或者更低的。開孔的填料多了個類似分子篩功能，所以選擇孔徑一定要關注分子量，蛋白（分子量5000以上）一般都需要在160A以上，多肽（分子量上限在3000左右）在120A左右，一般快速柱孔徑都很小，可以縮短樣品路徑。所以國際上還有無孔硅膠柱子，也很適合蛋白分離，徹底解決蛋白分子量大和太粘稠堵住孔徑問題。 碳載量：快速柱碳載量很低，如A家等，省時間，省溶劑，但分析部分復雜樣品如中藥等有點力不從心，這個時候可以考慮英國OL Apple色譜柱，碳載量15~23%，碳載量數(shù)值就像河床的水草，越高代表越密集，保留樣品能力越強，越有可能分離開難分離物質。 以上信息僅供參考，個人能力有限，歡迎大伙補充！ |
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