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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 蛋白電泳/WB » WB結果 請教
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WB結果 請教
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本人新手剛開始做，總是出現(xiàn)背景高，膜花花的情況 共有兩個目的蛋白一個內參。 流程：1.10ul上樣量，80v，120v電泳。 2.半干轉膜20v，1h（操作中發(fā)現(xiàn)膜剪得比膠大太多，不知是否有影響），緩沖液浸透濾紙。 3.5%脫脂奶粉25度封閉3h（由于之前做的背景高選擇封閉時間加長，之前一次37度2h），搖床震蕩。 4.一抗4度搖床孵育過夜，濃度兩個目的蛋白均為1：2000，內參1：5000（也是由于之前背景高，一抗?jié)舛扔?：1000變?yōu)?：2000，以封閉液稀釋） 5.tbst洗滌10min*4次 6.二抗1：10000，室溫1h（18度左右，也是由于背景高嘗試的，之前37度2h） 7.tbst洗滌10min*4次 8.ecl曝光（蛋白1.蛋白2可能有曝光液太多的情況，沒有吸干，不知是否有影響） 貼上結果圖，希望大神們可以指導一下為什么會出現(xiàn)這些情況（PTEN出現(xiàn)條帶但是很花，p53是直標一抗但也加了二抗還是沒有條帶，是否抗體不好，gapdh比較好看） 20160329.gadph.JPG 20160329.p53.JPG 20160329.pten.JPG |
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engreen2016
禁蟲 (正式寫手)
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2樓2016-08-03 09:34:35
liyushan1130
木蟲 (小有名氣)
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3樓2016-08-06 23:24:13
4樓2017-06-20 18:02:12
chaosyw
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 生物物理、生物化學與分子
5樓2017-06-20 18:59:02
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