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圓加leaf新蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
想讓大腸桿菌表達(dá)它原來(lái)沒(méi)有的蛋白，是不是必需先構(gòu)建克隆載體再構(gòu)建表達(dá)載體？
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本人想轉(zhuǎn)一個(gè)新的基因進(jìn)大腸桿菌，讓他表達(dá)原來(lái)沒(méi)有的一種蛋白，研究它的代謝量。 方式是靠構(gòu)建質(zhì)粒，可是又看到有基因克隆載體，和表達(dá)載體，有點(diǎn)懵了，我是不是需要先用一個(gè)克隆載體，轉(zhuǎn)化進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞，讓他復(fù)制，然后再提這個(gè)基因，再用這基因構(gòu)建一個(gè)表達(dá)載體，再轉(zhuǎn)進(jìn)細(xì)胞，然后才可以穩(wěn)定表達(dá)，研究代謝？！ 請(qǐng)各位前輩指導(dǎo)！！ |
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
圓加leaf: 金幣+5 2016-04-12 15:39:08
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
圓加leaf: 金幣+5 2016-04-12 15:39:08
| 你要用你的新基因表達(dá)蛋白，那就需要先把這段基因的全長(zhǎng)擴(kuò)出來(lái)，然后再連入表達(dá)載體中，一般原核表達(dá)載體就是用大腸桿菌來(lái)做的，然后，連接轉(zhuǎn)化進(jìn)去后，進(jìn)行檢測(cè)，轉(zhuǎn)化成功的，說(shuō)明你的那段基因連到質(zhì)粒上了，然后，你就可以做表達(dá)。但是，基因表達(dá)蛋白，是需要誘導(dǎo)的，你就需要緊接著做后面的誘導(dǎo)表達(dá)，檢測(cè)蛋白，跑膠，然后，得到了蛋白，你就可以做后面的針對(duì)這個(gè)蛋白的一些實(shí)驗(yàn)了。 |
11樓2016-04-01 22:40:29
sihaiming
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2樓2016-03-30 10:21:03
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圓加leaf: 金幣+4, 非常感謝！ 2016-03-30 13:41:53
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
圓加leaf: 金幣+4, 非常感謝！ 2016-03-30 13:41:53
| 姑娘不需要，直接構(gòu)建表達(dá)載體就行，參考大腸桿菌蛋白表達(dá)操作流程步驟原理：http://www.detaibio.com/topics/dachangganjunbiaodaliucheng-sop.html |
3樓2016-03-30 10:27:50
原海亮
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圓加leaf: 金幣+4 2016-03-30 13:42:18
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
圓加leaf: 金幣+4 2016-03-30 13:42:18
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其實(shí)克隆載體的概念太大也模糊，本身表達(dá)載體就是一個(gè)普通的克隆載體呀，只不過(guò)它本身經(jīng)過(guò)改造了，相對(duì)其他克隆載體，在蛋白表達(dá)方面更有優(yōu)勢(shì)，但基本的克隆載體功能它也具有。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
4樓2016-03-30 12:24:49
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