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JULIA606新蟲 (小有名氣)
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[交流]
新手將做免疫熒光，請(qǐng)教幾個(gè)問(wèn)題，謝謝賜教！
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大家好，近期打算做免疫熒光相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，查閱了一些資料，也在論壇看過(guò)大家的一些經(jīng)驗(yàn)。由于實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有做過(guò)相關(guān)實(shí)驗(yàn)的，在此請(qǐng)教大家?guī)讉�(gè)比較細(xì)節(jié)的問(wèn)題，多謝大家了！ 1.做海馬的免疫熒光，如果冰凍切片的話，用4%多聚甲醛前固定后，再后固定效果會(huì)比較好？但后固定的時(shí)間眾說(shuō)紛紜，這是所在實(shí)驗(yàn)室的經(jīng)驗(yàn)嗎？40min 2h 4h 24h的都有。還是可以新鮮組織可以不固定直接液氮固定后切呢？ 2.4%多聚甲醛前固定后，大家是用什么容器存放腦組織進(jìn)行后固定呢？是EP管，還是離心管，還是那種藥品玻璃瓶？或者有什么建議？ 3.對(duì)于多聚甲醛固定后，容易出現(xiàn)的自發(fā)熒光是如何處理的？抗熒光淬滅劑大家是用的什么的效果會(huì)比較好？ 4.冰凍切片的厚度切多少的比較好？選用的含F(xiàn)ITC的二抗，觀察時(shí)用什么顯微鏡效果更好？ 5.冰凍切片的話是不需要抗原修復(fù)的過(guò)程嗎？那通透呢？ 6.封片時(shí)大家做的用什么效果比較好？還是可以直接用抗熒光淬滅劑封片？ 目前先請(qǐng)教這幾個(gè)問(wèn)題，謝謝耐心解答！看到帖子的各位如有做腦組織免疫熒光的相關(guān)經(jīng)驗(yàn)建議，還望賜教，多謝！ |
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2樓2016-07-14 15:07:01
3樓2016-07-14 15:08:38
JULIA606
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4樓2016-07-14 18:50:35
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5樓2016-07-15 06:33:30
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6樓2016-07-15 08:14:24
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