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JULIA606新蟲 (小有名氣)
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[交流]
新手將做免疫熒光,請(qǐng)教幾個(gè)問題,謝謝賜教!
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大家好,近期打算做免疫熒光相關(guān)的實(shí)驗(yàn),查閱了一些資料,也在論壇看過大家的一些經(jīng)驗(yàn)。由于實(shí)驗(yàn)室沒有做過相關(guān)實(shí)驗(yàn)的,在此請(qǐng)教大家?guī)讉(gè)比較細(xì)節(jié)的問題,多謝大家了! 1.做海馬的免疫熒光,如果冰凍切片的話,用4%多聚甲醛前固定后,再后固定效果會(huì)比較好?但后固定的時(shí)間眾說紛紜,這是所在實(shí)驗(yàn)室的經(jīng)驗(yàn)嗎?40min 2h 4h 24h的都有。還是可以新鮮組織可以不固定直接液氮固定后切呢? 2.4%多聚甲醛前固定后,大家是用什么容器存放腦組織進(jìn)行后固定呢?是EP管,還是離心管,還是那種藥品玻璃瓶?或者有什么建議? 3.對(duì)于多聚甲醛固定后,容易出現(xiàn)的自發(fā)熒光是如何處理的?抗熒光淬滅劑大家是用的什么的效果會(huì)比較好? 4.冰凍切片的厚度切多少的比較好?選用的含F(xiàn)ITC的二抗,觀察時(shí)用什么顯微鏡效果更好? 5.冰凍切片的話是不需要抗原修復(fù)的過程嗎?那通透呢? 6.封片時(shí)大家做的用什么效果比較好?還是可以直接用抗熒光淬滅劑封片? 目前先請(qǐng)教這幾個(gè)問題,謝謝耐心解答!看到帖子的各位如有做腦組織免疫熒光的相關(guān)經(jīng)驗(yàn)建議,還望賜教,多謝! |
新蟲 (小有名氣)
木蟲 (小有名氣)
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