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紅箋小字木蟲 (小有名氣)
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用pDM4基因敲入,雙交換篩不到突變體
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| 宿主菌為假結(jié)核耶爾森氏菌,之前用pDM4做過(guò)兩次基因敲除或敲入,雙交換后篩20個(gè)左右,有4到5個(gè)為突變體。這一次同時(shí)做3個(gè),就是在基因組上的目的基因C端融合表達(dá)熒光蛋白,單交換都很順利得到,但是15%蔗糖平板劃線后,篩的單菌落都是野生型,每個(gè)篩了50個(gè)左右。上下游同源臂500到600bp,得不到突變體的原因是什么?請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的蟲友指點(diǎn)一二,謝謝。 |

木蟲 (小有名氣)

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