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ujsyangyong鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[求助]
GFP腺病毒感染細(xì)胞后子代細(xì)胞還帶綠色熒光嗎？ 已有1人參與
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| 請(qǐng)教各位蟲(chóng)友一個(gè)問(wèn)題，想用GFP腺病毒感染細(xì)胞用于標(biāo)記細(xì)胞，不知道子代細(xì)胞是否還具有綠色熒光。想將不同細(xì)胞共培養(yǎng)后用流式細(xì)胞儀分選，之前試過(guò)核熒光染料，效果不好，不知道蟲(chóng)友還有其他好的標(biāo)記方法推薦不？謝謝！ |
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ken19860823
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你說(shuō)的子代應(yīng)該是傳代后的細(xì)胞吧。病毒整合到基因組就會(huì)穩(wěn)定表達(dá)gfp，瞬時(shí)表達(dá)幾代傳代就丟失了。你應(yīng)該除了gfp外還需要一個(gè)篩選基因如puro，要藥殺幾代后都帶綠色熒光后基本就是整合到基因組了。你不篩選，傳幾代百分之99以上都是不帶gfp得了，你怎么用流式呢。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
2樓2016-04-09 18:48:49
ujsyangyong
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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我用腺病毒的目的就是短期標(biāo)記用的，將A細(xì)胞標(biāo)記完與B細(xì)胞共培養(yǎng)幾天后再用流式細(xì)胞儀基于綠色熒光分選收集不帶熒光的B細(xì)胞。慢病毒可以做穩(wěn)轉(zhuǎn)，但是慢病毒據(jù)說(shuō)感染率不高，而且我做的是原代細(xì)胞，不適合多次傳代篩穩(wěn)轉(zhuǎn)株。我的目的是標(biāo)記，所以想用感染率高的腺病毒，但是由于腺病毒不整合到基因組，又怕感染后細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的子代細(xì)胞不帶GFP，使得分離出來(lái)的細(xì)胞不純。 |
3樓2016-04-09 20:07:52
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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4樓2016-04-11 23:16:47
ujsyangyong
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5樓2016-04-12 09:12:37
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