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wo00wo2新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求幫助�。�！求告知關(guān)于做膜蛋白的表達(dá)，分離和純化的具體步驟�。�！ 已有2人參與
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 我正在做變形菌視紫紅質(zhì)在重組細(xì)胞上的表達(dá)，純化和分離的本科畢業(yè)論文。感受態(tài)細(xì)胞是大腸桿菌，對(duì)于我是零基礎(chǔ)重新開(kāi)始，我完全是菜鳥一個(gè)，可以告訴我詳細(xì)的純化，分離做法嗎？尤其是用qiagen公司的NI-NTA Agarose 25ML做柱層析，怎么裝柱，裝多少，怎么洗？我知道用蛋白濃度算填料多少，可是蛋白濃度怎么得到？我現(xiàn)在只做到了誘導(dǎo)蛋白在重組細(xì)胞上表達(dá)了。麻煩一定要詳細(xì)一點(diǎn)簡(jiǎn)單一點(diǎn)，我這是第一次接觸生物化學(xué)，本科是學(xué)化學(xué)的55555555.。。。。。。。。。。。。謝謝了，急用！�。。。� |
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moychan
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可以間斷，但是溫度最好保持在4℃，如果不能，粗提物加入后最好在最短的時(shí)間里洗脫蛋白，時(shí)間越長(zhǎng)降解越多 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-04-26 20:59:08
moychan
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裝柱你有空柱子嗎？有的話，把填料混勻直接加到柱子里就可以了，然后用蠕動(dòng)泵或者重力都可以，讓液面緩慢下降到填料上界面時(shí)，加平衡液平衡填料，再然后把你提到的細(xì)胞粗提物加到填料里，接著用平衡液再次洗柱子，然后用含咪唑的平衡液洗填料的同時(shí)接洗脫液。洗脫液里就有你要的蛋白。蛋白濃度可以測(cè)A280的吸光值來(lái)確定，或者有BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒也可以 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-04-25 19:38:20
wo00wo2
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3樓2016-04-26 11:05:08
moychan
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5樓2016-04-26 21:01:16
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