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[交流]
求助，CDNA做絕對定量的protocol 已有3人參與
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各位大神們，求助下 1我現(xiàn)在有反轉出來的cDNA（原始的rna樣也有）然后想做絕對定量，具體該怎么操作啊，看了很多帖子，一直沒明白做標準曲線之前的步驟要怎么搞 2這個cdna里邊不是有好多基因嗎 比如我想用gapdh做標準曲線 ，要先干嘛 pcr擴增？然后轉到質粒里邊？還是直接割膠回收?然后再梯度稀釋嗎？這個具體怎么操作 或者需要什么試劑盒 3是不是梯度稀釋完了 上機（羅氏480），測出來Ct值之后就可以做標曲啦 然后我跑實驗組和對照組 ，找對應的濃度，就可以比較表達量的多少了？ 4 假如上邊說的是對的，我有30多個基因要看 ?，是不是要做30個標曲 一個基因一個， 5不做相對定量是因為做的是溫度的實驗，β-actin gapdh?tubulin ? ?都是變化的? 有沒有哪位老師同學 解惑一下下 謝謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2016-12-27 18:03:47
yu-yumili
新蟲 (初入文壇)
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- 金幣: 42.3
- 帖子: 29
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- 專業(yè): 微生物生態(tài)學
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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樓主實驗完成了嗎？我現(xiàn)在也是要做功能基因的cDNA絕對熒光定量，關于質粒標準曲線構建方面還有一些問題 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2017-04-06 11:45:15
4樓2017-05-31 16:58:36
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