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鳳尋風(fēng)新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
求助，CDNA做絕對(duì)定量的protocol 已有3人參與
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各位大神們，求助下 1我現(xiàn)在有反轉(zhuǎn)出來(lái)的cDNA（原始的rna樣也有）然后想做絕對(duì)定量，具體該怎么操作啊，看了很多帖子，一直沒(méi)明白做標(biāo)準(zhǔn)曲線之前的步驟要怎么搞 2這個(gè)cdna里邊不是有好多基因嗎 比如我想用gapdh做標(biāo)準(zhǔn)曲線 ，要先干嘛 pcr擴(kuò)增？然后轉(zhuǎn)到質(zhì)粒里邊？還是直接割膠回收?然后再梯度稀釋嗎？這個(gè)具體怎么操作 或者需要什么試劑盒 3是不是梯度稀釋完了 上機(jī)（羅氏480），測(cè)出來(lái)Ct值之后就可以做標(biāo)曲啦 然后我跑實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組 ，找對(duì)應(yīng)的濃度，就可以比較表達(dá)量的多少了？ 4 假如上邊說(shuō)的是對(duì)的，我有30多個(gè)基因要看 ?，是不是要做30個(gè)標(biāo)曲 一個(gè)基因一個(gè)， 5不做相對(duì)定量是因?yàn)樽龅氖菧囟鹊膶?shí)驗(yàn)，β-actin gapdh?tubulin ? ?都是變化的? 有沒(méi)有哪位老師同學(xué) 解惑一下下 謝謝 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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新蟲(chóng) (初入文壇)
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2樓2016-12-27 18:03:47
yu-yumili
新蟲(chóng) (初入文壇)
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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樓主實(shí)驗(yàn)完成了嗎？我現(xiàn)在也是要做功能基因的cDNA絕對(duì)熒光定量，關(guān)于質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)曲線構(gòu)建方面還有一些問(wèn)題 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
3樓2017-04-06 11:45:15
4樓2017-05-31 16:58:36
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