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zhongliruoqi新蟲 (小有名氣)
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[求助]
請(qǐng)教小鼠腦片的冰凍切片的相關(guān)問題 已有1人參與
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大家好,請(qǐng)問有沒有大俠做過腦片的冰凍切片的?最近需要做相關(guān)的免疫實(shí)驗(yàn),腦片380um,純純的新手。。。而且實(shí)驗(yàn)室沒有做相關(guān)實(shí)驗(yàn)的。。各種查閱資料經(jīng)驗(yàn)以及請(qǐng)教其他實(shí)驗(yàn)室做過組織冰凍切片的同學(xué)后,自己在嘗試4%多聚甲醛固定過24h、4h的腦片在OCT包埋(剪去尖部的1.5mL EP管作為容器)和液氮速凍時(shí)還是感覺問題重重,主要有以下幾點(diǎn),希望可以與各位有相關(guān)經(jīng)驗(yàn)的同志們交流學(xué)習(xí),謝謝大家! 1.如果后續(xù)做免疫熒光的話,腦片切多少um效果更好?8um可以嗎? 2.OCT包埋時(shí),腦片距離包埋完畢時(shí)的OCT表面多少距離比較好(因?yàn)樯婕暗奖鶅銮衅瑫r(shí)的修塊問題) 3.腦片在OCT中很難保持水平,總會(huì)出現(xiàn)傾斜,如何解決呢? 4.OCT包埋時(shí)總會(huì)有些大小不等的氣泡,會(huì)影響之后的液氮速凍嗎?因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)液氮速凍后,包埋劑的表面不平整,總有些突起狀 5.如果在液氮速凍時(shí),釣入液氮罐的放有包埋好的樣品的EP管接觸到了漏入自制小盒的液氮液體,出現(xiàn)“沸騰狀”,會(huì)對(duì)包埋的樣品有影響嗎? 希望路過的朋友們可以給出一些意見或建議,交流學(xué)習(xí),謝謝大家! |
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