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基因敲除實驗，急需幫助，謝謝啦！
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我已經(jīng)做基因敲除試驗半年了，利用質(zhì)粒pUC19構(gòu)建用于基因敲除的自殺質(zhì)粒，抗生素抗性基因為cm，構(gòu)建好重組質(zhì)粒，然后進行電轉(zhuǎn)，以獲得同源重組菌，重復(fù)了多次，每次都能長出幾個菌落，但敲除后挑單菌落搖菌用PCR擴增，能擴增出cm片段和目的片段，但是缺失片段也能擴增出，傳代幾次PCR結(jié)果與之相似，而且做Western blot也能檢測到目的蛋白，難道cm基因插入非目標片段處，沒有同源重組掉嗎？請問導(dǎo)致這種情況的原因是啥？如何解決？非常感謝! [ Last edited by 魚蝦水中游 on 2016-4-27 at 17:25 ]@biostar2009 |
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3樓2018-03-28 13:55:18
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