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基因敲除實(shí)驗(yàn),急需幫助,謝謝啦!
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我已經(jīng)做基因敲除試驗(yàn)半年了,利用質(zhì)粒pUC19構(gòu)建用于基因敲除的自殺質(zhì)粒,抗生素抗性基因?yàn)閏m,構(gòu)建好重組質(zhì)粒,然后進(jìn)行電轉(zhuǎn),以獲得同源重組菌,重復(fù)了多次,每次都能長(zhǎng)出幾個(gè)菌落,但敲除后挑單菌落搖菌用PCR擴(kuò)增,能擴(kuò)增出cm片段和目的片段,但是缺失片段也能擴(kuò)增出,傳代幾次PCR結(jié)果與之相似,而且做Western blot也能檢測(cè)到目的蛋白,難道cm基因插入非目標(biāo)片段處,沒(méi)有同源重組掉嗎?請(qǐng)問(wèn)導(dǎo)致這種情況的原因是啥?如何解決?非常感謝! [ Last edited by 魚(yú)蝦水中游 on 2016-4-27 at 17:25 ]@biostar2009 |

新蟲(chóng) (初入文壇)
新蟲(chóng) (初入文壇)
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