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大腸桿菌高效生產的基因表達 已有2人參與
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大腸桿菌表達系統(tǒng)是基因表達技術發(fā)展最早的、目前應用廣泛的經(jīng)典表達系統(tǒng)。 要達到總蛋白20%以上的重組蛋白，不僅需要高效地表達系統(tǒng)，還要對系統(tǒng)進行良好的控制。表達外源蛋白所需要的能量和相當比例代謝流轉向合成目標代謝對細胞來首是個負擔，不利于細胞自身生長代謝。因此，根據(jù)為神武發(fā)酵的通用原則，將生長和產物合成分為兩個連續(xù)的階段，在第一階段將細胞培養(yǎng)到希望的密度，但并不啟動編碼目標蛋白的表達；在第二階段誘導表達重組基因，使產為大量合成。對前述所說工作必須有完善的基因表達技術。 一、載體（細胞/大腸桿菌）和表達系統(tǒng) 理想的大腸桿菌表達系統(tǒng)具備穩(wěn)定的遺傳復制、傳代能力；易于篩選標記；啟動子的轉錄是可控的，無誘導信號時不轉錄或轉錄水平很低；轉錄形成的mRNA能夠在適當位置終止，并且轉錄過程不影響載體的復制有正常生長；具備適用于外源基因插如的酶切位點。 常規(guī)表達系統(tǒng)：lac、tac 、PL、PR、t7等表達系統(tǒng)。 |
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