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大腸桿菌高效生產(chǎn)的基因表達(dá) 已有2人參與
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大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)是基因表達(dá)技術(shù)發(fā)展最早的、目前應(yīng)用廣泛的經(jīng)典表達(dá)系統(tǒng)。 要達(dá)到總蛋白20%以上的重組蛋白，不僅需要高效地表達(dá)系統(tǒng)，還要對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行良好的控制。表達(dá)外源蛋白所需要的能量和相當(dāng)比例代謝流轉(zhuǎn)向合成目標(biāo)代謝對(duì)細(xì)胞來(lái)首是個(gè)負(fù)擔(dān)，不利于細(xì)胞自身生長(zhǎng)代謝。因此，根據(jù)為神武發(fā)酵的通用原則，將生長(zhǎng)和產(chǎn)物合成分為兩個(gè)連續(xù)的階段，在第一階段將細(xì)胞培養(yǎng)到希望的密度，但并不啟動(dòng)編碼目標(biāo)蛋白的表達(dá)；在第二階段誘導(dǎo)表達(dá)重組基因，使產(chǎn)為大量合成。對(duì)前述所說(shuō)工作必須有完善的基因表達(dá)技術(shù)。 一、載體（細(xì)胞/大腸桿菌）和表達(dá)系統(tǒng) 理想的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)具備穩(wěn)定的遺傳復(fù)制、傳代能力；易于篩選標(biāo)記；啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄是可控的，無(wú)誘導(dǎo)信號(hào)時(shí)不轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄水平很低；轉(zhuǎn)錄形成的mRNA能夠在適當(dāng)位置終止，并且轉(zhuǎn)錄過(guò)程不影響載體的復(fù)制有正常生長(zhǎng)；具備適用于外源基因插如的酶切位點(diǎn)。 常規(guī)表達(dá)系統(tǒng)：lac、tac 、PL、PR、t7等表達(dá)系統(tǒng)。 |
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3樓2018-06-01 14:58:53
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2樓2016-06-28 05:53:30
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