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博克儂浮碼銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
雙酶切切不開(kāi) 已有1人參與
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| 做雙酶切，用的NEB的Bgl II和Nsil ，兩種酶都是同一種buffer3.1，但是為啥死活切不開(kāi)，雙酶切體系20ul與50ul的都試過(guò)了，實(shí)在找不出原因。 |
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atlanticwi
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2樓2016-05-05 18:24:22
sunguangchao
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15樓2016-05-10 05:22:03
atlanticwi
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1）如果你拿過(guò)來(lái)能切開(kāi)，轉(zhuǎn)大腸桿菌后再提質(zhì)粒，切不開(kāi)，問(wèn)題肯定在你這邊。兩種酶不存在甲基化影響，也就是你轉(zhuǎn)什么類型的宿主大腸桿菌應(yīng)該都沒(méi)問(wèn)題。所以只有一點(diǎn)，她給你的質(zhì)粒不純，你提質(zhì)粒的那個(gè)單菌落就是不對(duì)的。要質(zhì)粒的同時(shí)要圖譜是必須要做的事情。尤其是自己轉(zhuǎn)化的這種，必須用多對(duì)酶切組合，證明質(zhì)粒是對(duì)的。 2）沒(méi)有在NEB的說(shuō)明書上看到這兩個(gè)酶有什么問(wèn)題。你非要用的話，建議做兩個(gè)實(shí)驗(yàn)（先證明你的質(zhì)粒是對(duì)的） 其一，先加入一個(gè)酶酶切后，保證酶切完全的時(shí)間即可，失活第一個(gè)酶，再加入第二個(gè)酶（直接加酶，因?yàn)锽uffer一樣），酶切完全的時(shí)間反應(yīng)后，看結(jié)果。 其二，先加入一個(gè)酶酶切后，保證酶切完全的時(shí)間即可，PCR純化柱回收DNA后，重新加第二個(gè)酶的反應(yīng)體系作反應(yīng)�？唇Y(jié)果。 |
17樓2016-05-10 23:11:01
娟戀幸福
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3樓2016-05-05 23:49:30
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4樓2016-05-05 23:57:16
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5樓2016-05-05 23:58:27
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分別確定，用一定能切開(kāi)的酶和質(zhì)粒分別驗(yàn)證到底是哪出的問(wèn)題 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2016-05-06 11:23:45
7樓2016-05-07 00:27:11
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8樓2016-05-07 19:24:13
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9樓2016-05-07 21:10:03
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10樓2016-05-08 17:01:15
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